PcDNA3肿瘤坏死因子α真核表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

齐力; 季雪莲; 王秀梅; 张智清

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武警医学 ›› 2003, Vol. 14 ›› Issue (02) : 76-78.

论文

PcDNA3肿瘤坏死因子α真核表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

齐力;季雪莲;王秀梅;张智清

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Construction of pcDNA3 tumor necrosis factor-α(TNFα) vector and its expression in eukaryotic cells

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摘要

目的构建pcDNA3肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNFα)真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达.方法用双酶切方法由pBluescript/TNFa克隆载体上切下702bp的TNFa基因片段,将其克隆至pcDNA3真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞,了解其在真核细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性.结果pcDNA3 TNFα重组体经酶切后出现699bp片段,测序分析与文献报告结果完全一致,表明重组pcDNA3 TNFa表达质粒克隆成功.可见pcDNA3TNFα质粒在真核动物细胞中得到表达,TNFa蛋白能够杀伤L929细胞,表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有生物活性的TNFa蛋白.结论以脂质体介导pcDNA3 TNFa质粒转染真核细胞为基因治疗奠定了一定基础.

关键词

基因疗法 / 真核细胞 / 转染 / 肿瘤坏死因子a

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齐力;季雪莲;王秀梅;张智清. PcDNA3肿瘤坏死因子α真核表达载体的构建及其在真核细胞中的表达[J]. 武警医学. 2003, 14(02): 76-78

Construction of pcDNA3 tumor necrosis factor-α(TNFα) vector and its expression in eukaryotic cells[J]. Medical Journal of the Chinese People Armed Police Forces. 2003, 14(02): 76-78